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spektrale Messung nach Überführung des Hb's in Cyanohämoglobin.
Prinzip: Oxidation des Fe2+ mit K-Ferricyanid, es entsteht Methämoglobin das als stabiler CN-Komplex vorliegt.

(Sulfhämoglobin wird nicht mit gemessen)

-50mg KCN (Kaliumcyanid, ist ein Salz (K+;CN-))
Komplexierung des Met-hb zu Cyanomethb

-200mg Kalium-Hexa-Cyanoferrat(III)
oxidiert Hb zu Methb Fe2+ -> Fe3+ (Oxidationsmittel)

-1gr Na Bicarbonat (Puffer)

-0.01 % Detergenz
Lysierung (EC-Membran zum platzen, so ist erst Spektroskopie möglich)

Braucht: Spektrometer, Küvetten, Pipetten

1. Zwei Küveten werden je mit 3 ml Drabkin's Lösung bestückt

2. Zu einer der beiden Küvetten werden 10 ul Blut dazugegeben und gut vermischt

3.Nach 15 min wird die Extinktion bei 546 nm abgelesen. Die Extinktion der Kontrollküvette wird auf Null gesetzt
(Küvette als Kontrolle ->wird abgezogen v. Cyanid + Ery)

ε546= 44'000 l/(Mol×cm9)

MrHb (molare Masse von Hb) = 64458 g/Mol

d=1cm

Verdünnungsfaktor (3ml/10ul =3000/10) -> = 300

E (messen) -> ungefär = 0.24

cHb in g/l = E × 64458 × Verdünnungsfaktor=105,5 (ca)
                              44'000 × d

1. irritiert die Schleimhäute

2. blockiert Zellatmung, weil CN- eine hohe Affinität zu Fe3+ hat und Fe3+ als prothetische Gruppe an den Cytochromoxidasen der Atmungskette vorkommen. Die neue Komplexbildung unterbricht also die ATP-Bildung und so kann Sauerstoff nicht mehr zur Energiegewinnung gebraucht werden. Am Ende Tod durch Schädigung der Nervenzellen im Atemzentrum 

Konzentration der absorbierenden Substanz in der Lösung kann über das Ausmass der Absorption bestimmt werden. Dazu wird die Probe mit monochromatischem Licht bestrahlt, die Intensität des eingestrahlten Lichtes (Io) wird mit der Intensität des austretenden Lichtes (I) verglichen

Log Io/I = E  (E=Extinktion oder Absorption)

E ist prop zu
-Schichtdicke d
-Konz. des Stoffes c (Mol/l)
-zum jeweiligen molaren Extinktionskoeffizient ε ( l/(Mol×cm)

E=  ε × c × d

Abmax bei 555 nm
weinrot

2 Absmax: 541nm und 577 nm
leuchtend rot

2 Absorptionsmaxima bei 540nm &569nm
kirschrot
Komplex 300 mal stabiler als wenn mit O2 gebunden

2 Absorptionsmax : 504nm & 649nm
braun
funktionsuntüchtig
Fe3+ entstanden von e- Transport von Fe2+ auf O2

-Met-Hb als stabiler CN-Komplex (Oxidation von Fe2+ mit K-Ferricyanid)

-charakteristisches Absorptionsmaximum bei 540nm oder 546nm

2,5% Na2SO4 (verhindert Affregation der Errys)
0,5 % NaCl
0.25 % HgCl (Fixierung der Ec verantwortlich)

2,5% Na2SO4 (verhindert Affregation der Errys)
0,5 % NaCl
0.25 % HgCl (Fixierung der Ec verantwortlich)

Annahme: In 5 diagonal gezählten Felder insgesamt 461 Ec gezählt.
-> Entspricht 5 von 25 mm^2 -> Anzahl Ec noch mal 5 rechnen um Ec  Zahl pro mm^2 zu erhalten. ( 5×461=2305 Ec/mm^2)

Volumen = Fläche × Höhe (1mm^2 × 0,1 mm^2 =0,1 mm^3 oder 0.1 ul)
0,1ul=10^-7l

Um Ec Zahl pro Liter zu berechnen muss man nun 2305 Ec/10^-7
=2.305 × 10^10 Ec/Liter

Ec Zahl = Verdünnungsfaktor (Fv) × Zahlfaktor (Fz)
                                Volumen

=200 × 2307 = 4.61×10^12 Ec
      1×10^-7

Die gerinnungshemmende Wirkung beruht darauf, dass im Blut Antithrombin III zirkuliert, ein Enzym, das aktivierte Gerinnungsfaktoren wie Thrombin hemmt. Heparin bindet nun an Antithrombin III, was die von diesem katalysierte Reaktion etwa 1000-fach schneller ablaufen lässt.

Frauen: 140 (120-160)
Männer: 160 (140-180)

(g/l)

Frauen 0,42 (0,37 - 0,47)
Männer 0,47 (0,40 - 0,54)

(Fraktion)

Frauen: 4,5 (4,2-5,4)
Männer: 5,0 (4,6- 5,9)

(10^12/l)
Achtung pro 1 Liter (nicht 5 wie durchsch. Mensch)

Mittlere Hb-Konzentration der Erys (g/l)
(mean corpuscular/cellular hemoglobin concentration)
340 (320 - 360)
Hb (g/l)
Ht

Mittlere Hb-Menge eines Erythrozyten (pg)
(mean corpuscular/cellular hemoglobin)
30 (27-32)
Hb(g/l)
Ery (l^-1)

Mittlere Volumen eines Erythrozytenzahl (fl)
mean corpuscular/cell volume
90 (80-100)
  Ht
Ery(l^-1)









(in Klammern der 95%ige Wert)

Mittlere Volumen eines Erythrozytenzahl (fl)
mean corpuscular/cell volume
90 (80-100)
  Ht
Ery(l^-1)









(in Klammern der 95%ige Wert)

7 (5-10)
(10^9/l)

-gehören zu Zelloberflächenantigenen
-weisen enorme genetisch determinierte Vielfalt auf
-Bestehen aus:
    -polymorphen Proteinen (z.B. Rhesus-Faktor)
    - Heteroglykanen (z.B ABO-Antigene), kommen auf Glykoprot 
       und Glykolipiden vor

Histoblutgruppen: weil in verschiedenen Geweben exprimiert

-In den ersten Lebensjahren
-IgM, sog Agglutinine
-Entstehen: Auf Grund Immunreaktion gegen Darmbakterien und Nahrungsmittelantigenen, und zwar nur gegen Antigenen die der Körper als fremd erkennt.
-Die Agglutinine kreuzreagieren mit den Antigenen des ABO-Systems, was zur Agglutination der Erythrozyten und in vivo zur Hämolyse führt.

Am ABO locus (Chromosom 9) determiniert.
-Dieser enthält ein genetische Information für ein zuckerübertragendes Enzym (Glykosyltransferase).
-> Es gibt verschiedene allelische Varianten (sog Allozyme):
        -Inaktiv: Gruppe 0 oder H
        -Alpha-Galaktose: Blutgruppe A
        - Alpha-N-acetylgalaktosamin: Blutgruppe A
Die Allozyme übertragen es auf ein nicht antigenes Glycan.

Am ABO locus (Chromosom 9) determiniert.
-Dieser enthält ein genetische Information für ein zuckerübertragendes Enzym (Glykosyltransferase).
-> Es gibt verschiedene allelische Varianten (sog Allozyme):
        -Inaktiv: Gruppe 0 oder H
        -Alpha-Galaktose: Blutgruppe A
        - Alpha-N-acetylgalaktosamin: Blutgruppe A
Die Allozyme übertragen es auf ein nicht antigenes Glycan.

locus =  physikalische Position eines Gens im Genom
Allel =Verschiedene Ausprägungen oder Varianten dieses Gens

0:
GlcNAc - Gal
                     /
                Fuc

A
GlcNAc - Gal - GalNAc
               /
            Fuc

B
GlcNAc - Gal --- Gal
                     /
                Fuc

GalNAc = N-acetylgalactosamin, Gal = Galaktose, Fuc = Fucose,
GlcNAc = N-acetylglucosamin

Antigen,       Genotyp,            Serumagglutinine              Verteilung
Phänotyp       ABO                                                                   in der
                        Lo-cus                                                          Bevölkerung

keine (H)         OO                     Anti-A und Anti-B                  40%

Antigen,       Genotyp,            Serumagglutinine              Verteilung
Phänotyp       ABO                                                                   in der
                        Lo-cus                                                          Bevölkerung                    

A                   AA oder AO           Anti-B                              43%

Antigen,       Genotyp,            Serumagglutinine              Verteilung
Phänotyp       ABO                                                                   in der
                        Lo-cus                                                          Bevölkerung

     B             BB oder BO             Anti-A                               12%

Antigen,       Genotyp,            Serumagglutinine              Verteilung
Phänotyp       ABO                                                                   in der
                        Lo-cus                                                          Bevölkerung

A und B            AB                           keine                               5%

In Transfusionsmedizin unerlässlich

forensischen Vaterschaftsasschluss verwendet

Material: Anti-A Reagenz & Anti-B Reagenz (monoklonale Antikörper, mAB),
1.Auf einem Objektträger werden jeweils links je 1 Tropfen Anti-B, rechts je 1 Tropfen Anti-A mAB gegeben

2.In jeden Tropfen vermischt man mit dem Holzstab ein Tropfen des zu untersuchenden Blutes.

3.Nach 1-2 Minuten erfolgt dort, wo der mAB mit den E-
rythrozyten reagiert, eine von blossem Auge gut sichtbare Verklumpung (Agglutination).

4.Die Agglutination wird mit einer positiven Kontrolle (Blutprobe mit Blutgruppe A) bestätigt.

In seltenen Fällen ist das Resultat nicht eindeutig. In die-
sem Fall kann eine Untergruppe vorliegen (A1 etc), was durch spezialisierte Tests zu bestätigen ist.

Monoklonale Antikörper sind Antikörper, also immunologisch aktive Proteine, die von einer auf einen einzigen B-Lymphozyten zurückgehenden Zelllinie (Zellklon) produziert werden und die sich gegen ein einzelnes Epitop richten. Eine physiologisch vorkommende Immunantwort gegen ein in den Körper eingedrungenes Antigen ist dagegen stets polyklonal und richtet sich z. B. gegen viele verschiedene Epitope auf einem Bakterium.

Monoklonale Antikörper sind Antikörper, also immunologisch aktive Proteine, die von einer auf einen einzigen B-Lymphozyten zurückgehenden Zelllinie (Zellklon) produziert werden und die sich gegen ein einzelnes Epitop richten. Eine physiologisch vorkommende Immunantwort gegen ein in den Körper eingedrungenes Antigen ist dagegen stets polyklonal und richtet sich z. B. gegen viele verschiedene Epitope auf einem Bakterium.

-O2 wird zu 99% durch Bdg an das intraerythrocytäre Hb transportiert

- Sauerstoffbdg des Hb in Abhängigkeit des Partialdruckes des O2 (pO2) =sigmoide Kurve

P50: Der Sauerstoffdruck der nötig ist, um Hb zur Hälfte mit O2 zu beladen
->Mass für Affinität des O2 zum Hb: je niedriger der P50 desto höher die Affinität und umgekehrt
->Erhöht: H+Inonen-Konzentration, 2,3BPG, pCO2 & Temperatur
->Erniedrigt: wen gleiche Sachen erniedrigt sind. Also z.B
                       alkalischer PH
->P50 v. Vollblut: 27 Torr (mmHg)

Für bestimmung eines Teils  der Sauersstoffbindungskurve benötigen wir:
-Tonometer: Äquilibrierung der Blutprobe mit verschiedenen Sauerstoffpartialdrucken
-Oximeter: zur Messung der Sauerstoffsättigung


Das Tonometer: ist mit drei Gasflaschen verbunden, die jeweils einen festen Anteil (5 %) CO2 und wechselnde Anteile O2 enthalten, ungefähr 3%; 4%; 5%. Der notwendige Manometerdruck (Druck eines Mediums, hier Gas) sowie die passenden Gasflussraten im Tonometer sind bereits eingestellt.

-a) 5 ml Blut (Blutprobe eingestellt auf pH 7,0 und 7,4) werden in den Glasbecher des Tonometers eingefüllt und der Deckel des Tonometers wird dicht geschlossen (die Probe wird vor Praktikumsbeginn bereits eingefüllt und mit 3 % O2 ä-
quilibriert).

Vier verschiedene Blutproben werden untersucht:
#1: pH 7,0, bei 37 0C 
#2: pH 7,4, bei 37 0C 
#3: pH 7,4, bei 34 0C
#4: pH 7,4, bei 40 0C

(Die Temperaturen der Tonometer sind vor Praktikumsbeginn eingestellt.)

b) Der Haupthahn der ersten Flasche wird geöffnet und die Blutprobe wird während 15 min. mit dem Gasgemisch äquilibriert (STIRRER an).

c) Vor dem Aufsaugen der Blutprobe die 1 ml Spritze zweimal mit dem Gasgemisch im Tonometer spülen.

d) Stecken Sie eine Nadel auf die 1 ml Spritze und entfernen Sie das Kunststoffröhrchen. Durch Drücken der Taste Stirrer wird der Schüttelvorgang am Tonometer unterbrochen.

e) Etwa 0,3 ml Blut werden aus dem Tonometer durch die Öffnung im Wasserbaddeckel entnommen. Drücken Sie einen Bluttropfen aus der Spritze und entfernen Sie mit aufgesetztem Kunststoffröhrchen die Spritzennadel.

f) Stecken Sie nun die Spritze auf die schwarze Kappe einer neuen Einmalküvette. Halten Sie die Küvette im Winkel von 45o schräg nach unten und injizieren Sie so viel Blut in die Küvette, dass es bis zum Septum am anderen Ende reicht. Lassen Sie die Spritze an der Küvette.

Wichtig: Üben Sie beim Befüllen der Küvette keinen zu starken Druck aus. In der Küvette darf kein Überdruck entstehen bzw. sich das Septum nach aussen wölben.

 

1. schon kalibriert
2.Ergreifen Küvette an schwarzer Kappe, in Schlitz so dass blaue Seite d. Septum (Luftfilter) nach links.
3. Display Probtyp wählen
       - Patient  (Blut)
       -QC          (Kontrolle) ?????????
4. Küvette entfernen, ENTER/ON für Patient/Proband drücken
5. 2 mal  ENTER/ON Gerät für nächste Probe bereit.

Unabhängig von der Höhe über Meer

34 C     40 mmHg

37 C     47 mmHg

40 C     55 mmHg

Luftdruck/Barometerdruck steht an der Tafel

PO2 = Barometerdruck - Luftdruck × Anteil O2 (in %)

Nun kann man Punkte der Sauerstoffbindungskurve (pO2 vs O2 Sättigung) graphisch darstellen

Aus den Werten kann man ablesen:
-dass im Falle einer Temperaturabnahme P50 sinkt -> Linksverschiebung (Probe 3)
- Bei Probe 1 und 4 kommt es zu einer Rechtsverschiebung der Kurve, wegen der Temperaturerhöhung und PH-erhöhung

Antwort

Lagerung führt zu sinkender 2,3 Bisphosphoglycerat (2,3 BPG)
-> Linksverschiebung ->Hb gibt nur ungern O2 ab
(zwar genug Erys diese wollen  aber O2 nicht hergeben)

O2 Ct  (in ml/dl) = Gehalt an O2Hb

O2 Cap (in ml/dl) = Kapazität von O2Hb

O2 Ct  = 1,39 × tHb × O2 Hb ml/dl

O2 Cap = 1,39 ×  (tHb - COHb - MetHb)
 
Hüfner- Zahl = 1,39 ml O2 kann pro g Hb gebunden werden

SO2 = c(O2Hb)/totales Hb welches O2 binden kann ( tHb-MetHb-COHb)

SO2 = O2 Ct / O2 Cap

Bezeichnet: Je stärker Hb von O2 entsättigt wird desto mehr O2 kann in Form von Bicarbonat gebunden werden

Haldane-Effekt: CO2-Transportvermögen des Blutes ist abhängig vom O2-Partialdruck.

(1) hypochrom  MCH  ↓      /    mikrozytär  MCV ↓

Mangelzustände / Bildungsstörung   z.B. Eisenmangel / Thalassämien 

(2) hyperchrom MCH  ↑  /  makrozytär  MCV  ↑

Mangelzustände / Bildungs- und      Reifungsstörung  
z.B. Megaloblastische Anämie / MDS 

(3) normochrom MCH  n     /       normozytär  MCV  n

Zellverlust / Zellzerstörung / Bildungsstörung /Akute Blutung / Hämolyse / Verdrängung, Aplasie
 
 
 

Das Prinzip des Pulsoximeters beruht auf einem pulsierenden Zweiwellenlängen-Messsystem analog zum Oxymeter, wobei die beiden Wellenlängen bei 660 nm (stärkere Absorption durch Deoxy-Hb) und bei 940 nm (stärkere Absorption durch Oxy-Hb) festgelegt sind. Die Pulsation des arteriellen Blutes an
der Teststelle verändert jeweils die Übertragung des vom Sensor abgegebenen Lichts. Andere Körperflüssigkeiten und Gewebekomponenten pulsieren nicht, so der pulsierende Anteil des vom Photodetektor empfangenen Lichts erfasst
und dem O2-Hb zugeordnet werden kann. Dies ermöglicht die Bestimmung der
arteriellen O2-Sättigung.

Verteilund der Ec nach Häufigkeit ihres Durchmessers an

Cl- aus Plasma wird gegen das in den Ec gebildeten bicarbonat ausgetauscht

kontrollieren

Zellverlust:                  (akute →  chronische) Blutung   ( 3  →  1  ) 
Zellreifungsstörung :  Eisenmangel       (  1  ) 
Zellteilungsstörung:   Vitamin B 12-Mangel     (  2  ) 
Zellzerstörung:            Hämolyse        (  3  ) 
Zellbildungsstörung:  Verdrängung/ Aplastische Anäm

Häufigste Anämie weltweit: ca. 75 % aller Anämien wegen Eisenmangel!

Hypochrome, mikrozytäre Anämie

Ursachen des Eisenmangels:
primär  - erhöhter Bedarf wegen echtem Mangel
sekundär - Fehlverwertung, d.h. Speichereisen wird nicht in Hb eingebaut

Anämie:
Blutverlust
Hyperhydration
Eryschrumpfung

Polycythämie:
Hypoxie
P. vera (Entartung des roten KM)
Dehydration
Eryschwellung